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Descripción del producto

La enzima Ampliphi RT-G es una transcriptasa reversa proveniente del virus de la leucemia murina Moloney (MMLV RT), siendo la más utilizada en la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción reversa (RT-PCR) y en la amplificación específica de ARN debido a su alta actividad catalítica y fidelidad. Ampliphi RT-G es una ADN polimerasa recombinante que sintetiza una hebra de ADN complementaria (ADNc) a partir de ARN monocatenario, ADN o un híbrido ARN: ADN. La transcriptasa inversa del virus de la leucemia murina Moloney (M-MLV RT) carece de actividad ADN endonucleasa y tiene una menor actividad RNasa H. No posee actividad exonucleasa 3'-5' y tiene actividad RNasa. La proteína tiene un tamaño aproximado de 78.9 kDa, y su temperatura óptima de procesamiento está en el rango de 40°C-50°C.

Fuente

La enzima Ampliphi RT-G se sintetiza como proteína recombinante a partir de un gen sintético transformado en una cepa huésped de Escherichia coli, dando origen a una proteína ideal para ensayos que impliquen la generación de DNAc o librerías DNAc por amplificación en PCR convencional y PCR en tiempo real. 

Inhibición e inactivación

Inhibidores: Heparina, sales biliares de sangre y heces, ácido húmico y polifenoles de suelo y plantas, formalina y parafina de muestras fijadas con formalina y embebidas en parafina (FFPE). 

Inactivadores: Fenol y/o cloroformo.

Buffer de almacenamiento

La enzima se suministra en el buffer S compuesto por: Tris-HCl 100 mM pH 8.3, KCl 500 mM, MgCl2 15 mM, DTT 50 mM pH 8.0 y glicerol al 50%. 

Buffer RT 5X

Tris-HCl 250 mM pH 8.3, (NH4)2SO4 100 mM, KCl 185 mM y Tween 20 al 0,05%

Descripción de los buffers

• Alta eficiencia 

• Termoestable durante la síntesis del cDNA 

• Alta procesividad, generando fragmentos de hasta 8 kb 

• Actividad ribonucleasa H reducida 

Características

• Generación de la primera cadena ADNc a partir de ARNm total 

• Útil en la generación del DNAc a partir de RNA con estructuras secundarias fuertes que se reducen a temperaturas de 50ºC. 

Aplicaciones