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TaqG ADN Polimerasa

Presentaciones
50 reacciones
100 reacciones
5 x 100 reacciones
 

Descripción del producto

TaqG es una Taq ADN polimerasa producto de la fusión de la polimerasa TaqStoffel y el dominio de unión al ADN de una ligasa obtenida de Pyrococcus furiosus. Entre sus características más interesantes, TaqG posee una alta procesividad y termoestabilidad (tiene una vida media de 23 minutos a 99 ºC), lo que la faculta para la amplificación de sitios ricos en GC. TaqG tiene una resistencia significativa a inhibidores de PCR como heparina y lactoferrina, los cuales suelen ser inhibidores primarios abundantes en muestras clínicas y ambientales. TaqG es ideal para PCR convencional y posee actividad 5’ → 3’ nucleasa.

Fuente

Células de E. coli transformadas con un gen sintético compuesto por la secuencia de la TaqStoffel y el dominio de unión al ADN de una ligasa obtenida de Pyrococcus furiosus, dando origen a una enzima quimérica con características ideales para ensayos de PCR convencional.

Inhibición e inactivación

Inhibidores: detergentes iónicos (desoxicolato, lauroil sarcosinato de sodio y SDS) a concentraciones superiores a 0,06%, 0,02% y 0,01%, respectivamente.
Inactivadores: fenol y/o cloroformo.

 

Buffer de almacenamiento

La enzima se suministra en el buffer S, compuesto por: 20 mM Tris-HCl (pH 8,0); 1 mM DTT; 0,1 mM EDTA; 100 mM KCl; 0,5% (v/v) Nonidet® P40; 0,5% (v/v) Tween® 20; 50% (v/v) glicerol.

Buffer de trabajo

10X buffer TaqG con (NH4)2SO4

750 mM Tris-HCl (pH 8,8 a 25ºC); 200 mM (NH4)2SO4; 0,1% (v/v) Tween® 20.

Descripción de los buffers

 

Pruebas funcionales

La eficiencia de la TaqG ADN polimerasa se analizó en una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando una unidad de la enzima para amplificar una secuencia de 1000 pb, a partir 10 pg de ADN plasmídico. El producto de PCR resultante fué visualizado como una banda única en un gel de agarosa teñido con bromuro de etidio.

Control de calidad

Ensayo de actividad nucleasa

No se detectó actividad endonucleasa contaminante utilizando pUC19 incubado con 10 U de TaqG ADN polimerasa durante 4 horas a 37ºC.

No se detectó actividad exonuclease luego de la incubación de 1ug de ADN lambda/HindIII con 10 U de TaqG ADN polimerasa por 4 horas a 37 ºC.

Ensayo de nucleótidos residuales

No se detectaron nucleótidos residuales contaminantes a partir de TaqG ADN polimerasa mediante un ensayo de PCR.